血液瓊脂培養基的制備

一、實驗目的和要求

(1)掌握血液瓊脂培養基(血瓊脂培養基)的制備方法，明確血液瓊脂培養基的用途。

(2)鞏固掌握一般培養基和選擇性培養基的配制方法和原理。

二、基本原理

血液瓊脂培養基可用于分離營養要求高的微生物。一些病原性真菌或放線菌等難養微生物，對營養要求高甚至十分苛刻，而動物血是微生物生長繁殖的優良營養物。研究證明，在45～50℃時加入血液可以保存其中某些不耐熱的生長因子，促進微生物生長。血液瓊脂培養基也可用于溶血實驗。

三、實驗材料與設備

(1)培養基：牛肉膏朊胨培養基，見天然培養基——牛肉膏朊胨培養基的制備。

(2)儀器或其他用具：裝有5～10粒玻璃珠(Φ≈3mm)的無菌三角燒瓶、無菌注射器、無菌平皿等，其他儀器或用具與天然培養基——牛肉膏朊胨培養基的制備相同。

(3)動物：健康的兔或羊。

四、操作步驟

(1)牛肉膏朊胨培養基的制備見天然培養基——牛肉膏朊胨培養基的制備部分。也可用豆粉瓊脂(pH=7．4～7．6)等營養豐富的基礎培養基配制血液瓊脂培養基。

(2)無菌脫纖維兔血(或羊血)的制備：用配備18號針頭的無菌注射器以無菌操作抽取全血(即未經處理的靜脈抽血)(無菌采血操作)，并立即注入裝有無菌玻璃珠(Φ≈3mm)的無菌三角燒瓶中，然后搖動三角燒瓶1．0min左右，形成的纖維朊塊會沉淀在玻璃珠上，把含血細胞和血清的上清液傾人無菌容器即得到脫纖維兔血(或羊血)，置冰箱4℃存儲備用。

注意：整個過程必須嚴格無茵操作。制備脫纖維血液時，應搖動足夠時間以防凝固。也可以直接購買脫纖維兔血(或羊血)。

(3)血液瓊脂培養基的制備：將牛肉膏朊胨瓊脂培養基溶化，待冷卻至45～50℃時，以無菌操作方式，按10％(體積分數)的量加入無菌脫纖維兔血(或#血)于培養基中，立即搖蕩，以便血液和培養基充分混勻。根據具體情況，還可以考慮是否加入10g／L的葡萄糖。

45～50℃加入血液是為了保存其中某些不耐熱的營養物質和保證血細胞的完整，以便于觀察細菌的溶血作用；同時，在這種溫度下瓊脂不會凝固。

(4)迅速以無菌操作倒入無菌平皿中，即成血液瓊脂平板，注意不要產生氣泡。

(5)置37℃培養箱24h，如無菌生長即可使用。

五、實驗報告

(1)消毒、滅菌和除菌有何異同?請列表比較。

(2)高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、紫外線滅菌和微孔濾膜除菌有何異同?列表比較各自的特點和適用范圍。

(3)培養基制備的一般步驟和注意事項是什么?

(4)各種培養基成分的對于微生物生民的主要功能是什么?

(5)各種培養基的適用范圍是什么?列表比較牛肉膏朊胨培養基、高氏I號培養基、馬丁氏培養基和血液瓊脂培養基的成分、特點及應用范圍。

(6)為何培養基制作一般選用瓊脂作為固定劑而不是其他物質?瓊脂是*的固定劑嗎?有非瓊脂固定培養基嗎?

(7)培養基配制過程中，pH如何變化?究竟如何控制和獲得適宜的微生物培養pH?pH的調節會影響培養基的物理化學性質嗎?

(8)請對照有關國家要求，比如WS 233—2002和GB 19489—2008等，如果開展血液瓊脂培養，注意實驗室基礎條件是否具備?

(9)盡管目前已經有很多培養基的配方，但科學界普遍認為，于實驗條件和認知水平所限，人類目前已知的微生物僅占所有微生物的1％，99％左右的微生物尚不為人類所知，請問原因是什么?你能否更新設計一種或多種培養基，來獲取和認識更多的微生物?